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公司地址:上海松江区明中路1588弄1072号
企业信息
注册资本:50---100万
注册时间: 2015-08-20
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密度梯度离心法的缺点是:离心时间长、需制备密度梯度介质溶液、对操作者的技能要求较高.密度梯度离心法通常采用吊桶式的水平转子、区带转子及近垂直转子!离心前,离心管内先装入分离介质(如蔗糖、ganyou等),使形成连续的或不连续的密度梯度介质,然后加入样品进行离心,具体又可分为:速度区带离心前,离心管内先装入蔗糖、甘you、CsCl、Percoll等密度梯度介质,待分离样品铺在梯度液的顶部,离心管底部或梯度层中间,同梯度液一起离心,利用各颗粒在梯度液中沉降速度或漂浮速度的不同,使具有不同沉降速度的颗粒处于不同密度的梯度层内,达到彼此分离的目的。
本法可分离各种细胞、病毒、染色体、脂蛋白、DNA和RNA等生物样品离心技术,是蛋白质、酶、核酸及细胞亚组分分离的zui常用的方法之一,也是生化实验室中常用的分离、纯化或澄清的方法!尤其是超速冷冻离心已经成为研究生物大分子实验室中的常用技术方法!差速离心是根据颗粒大小和密度不同造成沉降速度(即沉降系数)的差异,通过分级提高离心转速或高速与低速离心交替进行,使具有不同质量的颗粒样品(或大分子)从混合液中分批沉降至管底,从而实现分离目的.
在挑选这一点的时候还要注意检查管盖是否严密,在试验时能否盖严,以到达倒置不漏液;我们都知道在塑料离心管中,常用材料有聚乙烯(PE),聚碳酸酯(PC),聚丙烯(PP)等,其中聚丙烯PP管性能会相对较好,所以,我们在挑选塑料离心管时尽可能的考虑聚丙烯的塑料离心管!玻璃离心管使用玻璃管时离心力不宜过大,需要垫橡胶垫,防止管子破碎,高速离心机一般不选用玻璃管.离心管盖子封闭性不够好,液体就不能加满(针对高速离心机且使用角转子)以防外溢,失去平衡。
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该方法适用于混合样品中各沉降系数差别较大的组分之间的分离,更准确地说是沉降系数差别在1至几个数量级的混合样品的分离,差别越大,分离效果越好差速离心法一般采用固定角转子,通过较低速度的离心沉淀,zui重的颗粒将全部沉到管底!继续将上清液以更高的转速沉淀,即可得到次重的颗粒样品。逐步增加离心转速,即可分别得到不同重量的样品颗粒,以达到分离的目的.但以上只是理想状态,通常每步得到的沉淀并不均一,通常会混有较轻的颗粒!
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这是因为在离心前各种重量的颗粒均匀分布在溶液中,当开始离心后,所有颗粒都依照自身的沉降速度向管底移动,所以距离管底较近的轻颗粒也会沉到管底而混合到重颗粒之中.通常为了得到较纯的颗粒样品,还需要将沉淀重悬,用相同的转速再次沉淀。重复几次之后即可得到大小基本均一的颗粒!但是一般在实际使用中,差速离心通常不用于精细分离!仅用于s值相差1个数量级及以上的2种颗粒的分离,且沉淀不能实现完全回收!差速离心技术的应用十分普遍,尤其是针对有生物活性的物质,如动植物病毒、各种亚细胞组分(细胞核、叶绿体、线粒体等),以及核酸和蛋白质等生物大分子的分离、粗提和浓缩。
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