对于贴壁生长的细胞，由于在胰酶等消化处理过程中会造成细胞膜的损伤，会造成较高的假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测，可将胰酶消化后的细胞保存在含2%BSA的PBS中，防止进一步的损伤.尽管目前，包括国外也有一些单位采用该方法检测贴壁生长的细胞!我不推荐用该方法检测。因为其重复性较差，且需要操作时非常小心！消化贴壁细胞残留的胰酶会消化并降解AnnexinV-FITC，最终导致染色失败！细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品.

　　AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒包装规格产品货号：An0020、An0050、An0100规格：20T、50T、100T储存条件4ºC保存，一年有效产品介绍：磷脂酰丝氨酸（PS）是一种带负电荷的磷脂，正常细胞中，PS只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜PS由脂膜内侧翻向细胞膜外侧，使PS暴露在细胞膜外表面.AnnexinV是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合.

南京悬浮细胞凋亡检测染料图

　　试剂盒组份：Reagents/20assays/50assays/100assays/StorageAnnexinV-FITC产品货号：FI001/100μl/250μl/500μl/4°C避光PropidiumIodide,PI产品货号：PI002/200μl/500μl/1000μl/4°C避光BindingBuffer(4×)产品货号：BU002/4ml/10ml/20ml/4°C所需实验器材：微量移液器；PBS；不含EDTA的胰酶消化液；低速离心机；流式细胞仪注意事项：此试剂盒仅供研究使用。

　　因此采用AnnexinV与PI双染的方法，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来.试剂盒组份：Reagents/20assays/50assays/100assays/StorageAnnexinV-FITC产品货号：FI001/100μl/250μl/500μl/4°C避光PropidiumIodide,PI产品货号：PI002/200μl/500μl/1000μl/4°C避光BindingBuffer(4×)产品货号：BU002/4ml/10ml/20ml/4°C操作说明：细胞样品的准备：a)悬浮细胞：1）收集细胞至离心管中1000-2000rpm离心5min，小心去除上清。

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　　因此AnnexinV被公认为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒将AnnexinV进行绿色荧光（FITC）标记，以标记了的AnnexinV作为探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生！碘化丙啶（PropidiumIodide,PI）是一种核酸染料，它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和坏死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红！

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