注：加入的细胞培养液一方面可以收集已经悬浮的发生凋亡或坏死的细胞，另一方面细胞培养液中的血清可以有效抑制或中和残留的胰酶；残留的胰酶会消化并降解后续加入的AnnexinV-FITC导致染色失败！4）用1ml4℃预冷PBS轻轻重悬细胞并计数，1000-2000rpm离心5min，小心吸除上清！5）再加入1ml4℃预冷的PBS重悬细胞，1000-2000rpm离心5min，小心吸除上清!用去离子水按1：4稀释BindingBuffer（4mlBindingBuffer+12ml去离子水）；用250ul结合缓冲液重新悬浮细胞，调节其浓度为1×106/ml；取100ul的细胞悬液于5ml流式管中，加入5ulAnnexinV-FITC，轻轻混匀；室温(20-25℃)避光孵育10min；上机前5min加入10ul碘化丙啶溶液，轻轻混匀；上机前在反应管中补加400ulPBS重悬细胞，避光保存，随即进行流式细胞仪（FACS）检测，AnnexinV-FITC为绿色荧光，PI为红色荧光.

　　深圳市安培生物科技有限公司坐落于深圳市宝安区新安街道宝民社区创业二路5号建设银行楼创业二路5-1，是广东深圳宝安区知名企业，公司业务联系人华伟：19126518388， 期待您的来电咨询更多关于细胞凋亡检测相关信息！

北京细胞凋亡检测方法

　　 关于细胞凋亡检测，作为一家主营产品为Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒的厂家，深圳市安培生物科技有限公司在生物化工这个行业中都享负盛名，在业界中也有一定的地位。

　　因此AnnexinV被公认为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一！AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒将AnnexinV进行绿色荧光（FITC）标记，以标记了的AnnexinV作为探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶（PropidiumIodide,PI）是一种核酸染料，它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和坏死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红!

　　2）用1ml4℃预冷PBS轻轻重悬细胞并计数，1000-2000rpm离心5min，小心吸除上清！3）再加入1ml4℃预冷的PBS重悬细胞，1000-2000rpm离心5min，小心吸除上清!b)贴壁细胞：1）吸出细胞培养液至离心管中，PBS洗涤贴壁细胞一次，加入适量不含EDTA的胰酶细胞消化液消化细胞！2）室温孵育至轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，吸除胰酶细胞消化液。需避免胰酶的过度消化。3）加入以上步骤中收集的细胞培养液，稍混匀，转移到离心管内，1000-2000rpm离心5min，小心吸除上清。

　　AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒包装规格产品货号：An0020、An0050、An0100规格：20T、50T、100T储存条件4ºC保存，一年有效产品介绍：磷脂酰丝氨酸（PS）是一种带负电荷的磷脂，正常细胞中，PS只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜PS由脂膜内侧翻向细胞膜外侧，使PS暴露在细胞膜外表面.AnnexinV是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合!

　　试剂盒组份：Reagents/20assays/50assays/100assays/StorageAnnexinV-FITC产品货号：FI001/100μl/250μl/500μl/4°C避光PropidiumIodide,PI产品货号：PI002/200μl/500μl/1000μl/4°C避光BindingBuffer(4×)产品货号：BU002/4ml/10ml/20ml/4°C所需实验器材：微量移液器；PBS；不含EDTA的胰酶消化液；低速离心机；流式细胞仪注意事项：此试剂盒仅供研究使用。